流式細胞術(FCM)是一種對處在快速流動中的細胞或其它生物微粒逐個進行多參數的快速定量分析和分選的技術。它集計算機技術、激光技術、流體力學、熒光標記技術、單克隆抗體技術、細胞免疫學于一體,按照細胞或生物顆粒的物理或化學性質,同時具有分析和分選細胞或生物顆粒的功能。
流式細胞術在科研方面有哪些應用?讓我們一起來看看吧!
一、細胞凋亡檢測
在正常細胞中,細胞膜上的磷脂酰絲氨酸(PS)位于胞漿側。細胞凋亡中期,PS 外翻。Annexin V 是一種 Ca2+ 依賴的對 PS 具有高度親和力的磷脂結合蛋白,因此可以用熒光標記的 Annexin V 檢測 PS 的外翻。凋亡末期,細胞膜結構受損,原本不透膜的核酸染料(如 PI、7-AAD 等)也能進入細胞,從而產生信號。分別檢測 Annexin V 和不透膜核酸染料的信號,可對凋亡中期和末期細胞的比例進行定量。
二、細胞周期檢測
細胞核 DNA 含量隨著細胞增殖周期時相的不同而發生變化,用 DNA 染料進行染色,DNA 含量多,熒光信號強,DNA 含量少,熒光強度低。通過對細胞瞬間的快速測定,判斷細胞所處的細胞周期時相,并分析群體細胞中處于不同周期時相的細胞比例,以研究細胞的周期,DNA 復制和染色體倍性等。在腫瘤學研究中尤其常用,可以此來判斷藥物對腫瘤細胞影響、腫瘤的生長速度與患者預后等。
三、Th/Treg檢測
通過刺激阻斷劑對 T 細胞進行處理,通過檢測表面或胞內標志物進行分型檢測。
四、免疫分型檢測
利用細胞表面或細胞內特異性抗體分子,分別選用不同標記的流式抗體對細胞進行分型和分析。