細胞因子,是一類由免疫細胞和某些非免疫細胞(內皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等)在受到刺激后合成和分泌的小分子蛋白質,具有廣泛的生物學活性,通過結合相應受體,調控細胞生長、分化、凋亡、傷口愈合、信號轉導和穩態平衡。研究細胞因子為臨床上疾病的預防、診斷、機理研究以及治療奠定了堅實基礎,其應用前景廣泛。那么你知道細胞因子檢測的常見免疫學技術有什么嗎?讓我們一起來看看吧!
一、傳統Western Blot
傳統蛋白質免疫印跡法(Western Blot,WB)是一種常見的蛋白質免疫分析技術,被應用于確認特定蛋白質的存在并進行定性和半定量分析。WB實驗基于抗原抗體特異性反應,經過SDS-PAGE分離蛋白質后,將其轉移到硝酸纖維素薄膜(NC)或聚偏二氟乙烯膜(PVDF)。隨后,使用脫脂牛奶封閉液進行封閉,一抗稀釋液進行孵育。蛋白質與抗體結合后,通過洗滌去除未結合的一抗,接著加入酶標記或者熒光標記的二抗。最后,利用化學發光液或者特定的激發光源,對靶蛋白進行檢測,可以通過膠片、化學發光儀或熒光成像儀進行成像,最終捕捉到蛋白條帶。
二、全自動毛細管Digital Western
作為創新性毛細管電泳免疫學技術,全自動毛細管Digital Western(也稱Simple Western)將Western Blot技術和ELISA技術合二為一,具備傳統WB蛋白質可視化定性優勢,同時具備ELISA免疫學實驗精準定量能力,其靈敏度和精密度符合高標準生物分析要求,可利用超微量樣本實現內源性蛋白質精準定量。自動化規避了傳統WB和SDS-PAGE勞動密集型操作引入的人為誤差。僅需要微量樣本(3μL)即可實現多重蛋白質表達檢測,節約珍貴樣品,
三、傳統ELISA
酶聯免疫吸附測定法是一種常用的免疫測定方法,通常用于定量檢測樣本中目的蛋白的水平。利用ELISA檢測的樣本包括血清、血漿、細胞培養上清液、細胞裂解物、唾液、組織裂解物和尿液。ELISA通常在96孔板中進行,孔板中包被有一種捕獲特定分析物的抗體。在與實驗樣本、標準品或對照品孵育后,目標分析物將被這種抗體捕獲。隨后使用結合到目標分析物不同抗原表位的檢測抗體完成"夾心"結構。接著加入底物溶液,產生的信號與結合的分析物量成比例。ELISA有不同形式,包括直接法ELISA、間接法ELISA、夾心法ELISA和競爭法ELISA。
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