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產(chǎn)品名稱:食管癌3D類器官培養(yǎng)基(ESophaqus Carcinoma Organoid Medium)
產(chǎn)品說明:食管癌3D類器官培養(yǎng)基(ESophaqus Carcinoma Organoid Medium)是一種為促進(jìn)食管鱗癌類器官體外形成和擴(kuò)增而設(shè)計的培養(yǎng)基。它是一種無菌的液體混合系統(tǒng),含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機(jī)和無機(jī)化合物、激素、生長因子、微量礦物質(zhì)等。該培養(yǎng)基的*配方可以提供一個較適的食管鱗癌類器官擴(kuò)增所需營養(yǎng)環(huán)境,選擇性地促進(jìn)體外人食管鱗癌類器官的生長。
產(chǎn)品優(yōu)勢:
(1) 培養(yǎng)成功率高
(2) 體外持續(xù)擴(kuò)增
(3) 保持腫瘤特征
(4) 藥敏結(jié)果與臨床數(shù)據(jù)接近
使用說明:
?實驗前準(zhǔn)備
(1)消化好的食管癌原代細(xì)胞懸液。
(2)15mL無菌離心管、1.5mL離心管、24孔細(xì)胞培養(yǎng)板、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30 min。
(3)提前30min從4℃冰箱取出食管癌類器官培養(yǎng)基平衡至室溫,提前從-20℃冰箱取出所需體積的基質(zhì)膠冰上融化。
?食管癌類器官培養(yǎng)
(1)將消化好的食管癌細(xì)胞懸液計數(shù),按照1-2萬細(xì)胞每孔計算所需的細(xì)胞數(shù),根據(jù)計算好的體積吸取細(xì)胞懸液加入預(yù)冷的1.5mL離心管中,補(bǔ)齊預(yù)冷的DMEM/F12至所需體積。
(2)將預(yù)冷后的細(xì)胞懸液加入等體積的基質(zhì)膠中輕輕混勻(全程冰上操作),然后將細(xì)胞與基質(zhì)膠的混合液按照40μL/孔接種于24孔板。
(3)將接種好的培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱至少30min,待基質(zhì)膠*凝固,然后沿24孔壁每孔緩慢加入500μL預(yù)先恢復(fù)至室溫的類器官培養(yǎng)基,3天后鏡下觀察類器官形成情況,粒徑大于50μm即認(rèn)為類器官已經(jīng)形成。
(4)每5天更換一次培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),持續(xù)觀察類器官大小,鏡下觀察大部分類器官大小均大于50μm且大小不再增大即可收集類器官進(jìn)行后續(xù)實驗。
?食管癌類器官收集
(1)吸去培養(yǎng)基,每孔加入200μL基質(zhì)膠解離試劑,輕輕吹打混勻,收集至15mL離心管中。
(2)37℃解離30min(具體解離時間根據(jù)實際情況決定,以無明顯大塊膠狀物為準(zhǔn)),解離之后1500rpm離心3min,輕輕吸去上清,待用。
?食管癌類器官傳代
(1)解離之后的細(xì)胞加入適量的消化酶,37℃,200rpm消化(具體時間根據(jù)類器官大小和數(shù)量決定,以無肉眼可見顆粒為準(zhǔn))。
(2)消化*后1500rpm離心3min,輕輕吸去上清,使用終止培養(yǎng)基重懸后1500rpm離心3min,加入預(yù)冷的DMEM/F12培養(yǎng)基進(jìn)行重懸,計數(shù),按照培養(yǎng)步驟操作繼續(xù)培養(yǎng)。
注意事項:
1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
2.使用產(chǎn)品時應(yīng)注意無菌操作,避免污染。
3.為保持本產(chǎn)品的理想使用效果,不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。4.請于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品,超出保質(zhì)期,必須放棄使用。
5.樣本需為食管鱗癌術(shù)中樣本,且腫瘤細(xì)胞比例越高(至少>50%),培養(yǎng)成功率越高,不推薦用于少量樣本(如內(nèi)鏡或者循環(huán)腫瘤細(xì)胞)的培養(yǎng)。
6.本產(chǎn)品僅用于科研用途,不能用于體外診斷。